大腸がん患者を対象とした抗VEGF 療法の治療効果向上を目指した胃酸分泌抑制薬の最適化VIKING 法に従って行った 11）。細胞を Opti-MEM（Gibco、米国）に懸濁し、TurboFect Transfection試薬（Thermo Scientific、米国）を用いて、VIKINGモジュールおよび ER 遺伝子座特異的切断ベクター中の 15 μg DNA をメーカーのプロトコールに従ってトランスフェクトした。形質転換した細胞は 14 日後にセルソーター（BD FACSMelody; BD Biosciences、米国）を用いて分離した。単離した各細胞株のゲノムDNA について、GoTaq マスターミックス（Promega、米国）または KOD FX Neo（東洋紡）を用いて PCR増 幅 を 行 い、Sanger sequencing service （Eurofins Genomics）を用いて塩基配列を決定した。ER 遺伝子ノックイン細胞株の樹立 NEBuilder HiFi DNA Assembly （New England Biolabs、米国）を用いて、ER ノックイン細胞株のドナープラスミドとして 5′ 末端 FLAG タグ付きヒト ER の cDNA を、ネオマイシン耐性遺伝子をブラスチジン耐性遺伝子に置換した pcDNA3 ベクター（Invitrogen、米国）に挿入した。安定発現を達成するために、ヒトアデノ随伴ウイルス統合部位 1（hAAVS1）セーフハーバー遺伝子座をノックインターゲットとして選択した。VIKING 法では、細胞を ESR1 発現ドナープラスミド、ドナー切断ベクター VKG1-gRNA-pX330 および遺伝子座特異的切断ベクター AAVS1-gRNA-pX3301 で導入した。遺伝子発現解析 Lansoprazole（東京化成工業）、Vonoprazan Fumarate（MedChem Express LLC、米国）、Fulvestrant（Selleck Chemicals LLC、米国）は、いずれもジメチルスルホキシドに溶解して使用した。細胞は 5.0 × 104 cells/mL で播種し、薬剤を曝露後、5％ CO2 インキュベーター内で 37 ℃、24 時間培養した。その後、RNeasy® Plus Mini Kit （QIAGEN、米国）を用いてメーカーのプロトコールに従って RNA を抽出し、（承認番号：4492）。また、本研究はヘルシンキ宣言が C18-20 の病名を大腸がんとした。（ナカライテスク）で培養した。すべての細胞は、に置き換えられ、匿名加工処理が行われているため、日本では倫理委員会の承認や個別の同意は不要である。しかし、本研究は、「人を対象とする生命科学・医学系研究に関する倫理指針」を遵守して実施したおよびその他の関連するガイドラインおよび規制を遵守した。 2015 年 1 月から 2020 年 12 月の間に初めてベバシズマブ投与を受けた患者を対象とした。疑いや転移性の病名を削除し、その中から診断名が最初に付いたがん種を原発のがん種とし、ICD10 コード ベバシズマブ投与が 1 度のみの患者は、アナフィラキシーによる中止など、治療効果とは無関係に治療を中断したとみなし、解析から除外した。PPI とボノプラザンの服用については、ベバシズマブの初回投与日に服用しており、投与後 30 日以降にも服用のあった患者を服用ありとした。解析にはNaviCat 15 for SQLite（PremiumSoft CyberTech社、香港）を使用した。細胞培養 A549（ヒト肺がん細胞株）、MCF7（ヒト乳がん細胞株）、OVK18（ヒト卵巣がん細胞株）およびLOVO 細胞（ヒト大腸がん細胞株）は理研バイオリソースセンターより入手した。LS174T ヒト結腸がん細胞株は ATCC（バージニア州マナサス、米国）から購入した。細胞は、10％ウシ胎児血清（BioWest、米国）および 10 mg/mL 1％（v/v）ペニシリン -ストレプトマイシン（Wako）を添加した RPMI 16405%（v/v）の CO2 を含む加湿雰囲気下、37 ℃で培養した。ER 遺伝子ノックアウト細胞株の樹立 CRSPR/Cas9 を 介 し た ESR1 遺 伝 子 編 集 を55
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