65432102PAMUnnw2PAMUnnw)1>CF2goL(nosserpxeeneGwnnUMAP1wnnUMAP11617ClusterDominant cell type1617Dominant cell type感染患者）感染（無症候性キャリア）非感染MAP3K8 遺伝子座HAM特異的OCR結 果統計的解析手法 2 群間の統計学的有意差は、両側 Student's t 検定および対応のある t 検定により適切に評価した。3 群以上については、両側 ANOVA 検定およびKruskal-Wallis 検定により評価した。2 群の相関係数は、Pearson's および Spearman's の両側検定により評価した。HAM 特異的オープンクロマチン領域の探索 HAM 患者（N = 2）および無症候性キャリア（N = 3）の PBMC を用いて、シングルセルマルチオーム解析を実施し、49645 細胞のデータを取得した。UMAP（Uniform Manifold Approximatoin and Projection）による 2 次元圧縮によるクラスター分類の結果、HAM 患者由来の HTLV-1 感染細胞と無症候性キャリア由来の HTLV-1 感染細胞は、異なるクラスターに分類された（図 1A）。したがっ図 1 HAM 患者および無症候性キャリアの末梢血単核球を用いたシングルセルマルチオーム解析A UMAP によるクラスタリング（上）HBZ 遺伝子発現（下） B 遺伝子発現とクロマチンアクセシビリティの比較解析C MAP3K8 遺伝子座における OCR D CD4＋細胞群におけるシュードタイム解析（左）、MAP3K8 遺伝子座における HAM 特異的 OCR のピーク値（右）A、C、D 文献 10）より引用、改変。36を用いて、ChIP サンプルを用意した。抗 Fosl2 抗体（#19967、Cell Signaling Technology）、 抗 Tax抗体（LT-4, 田中勇悦先生より供与いただいた）、Mouse mAb IgG1 Isotype Control（#5415、 Cell Signaling Technology）、Normal Rabbit IgG（#2729、 Cell Signaling Technology） は 免 疫 沈 降 の た め に使用された。ライブラリーの生成およびシーケンスは GENEWIZ 社に委託した。NovaSeq 6000 system により得られたデータは、Bowtie2（v2.5.2）に よ り ア ラ イ メ ン ト さ れ、Samtools（v1.19）、MACS2（v2.2.7.1）および HOMER（v4.11）によりピークコールおよびモチーフ解析が実行された。MEK 阻害剤 Binimetinib、cobimetinib、selumetinib、 お よ びtrametinib（Cayman Chemical）は本研究におけるMEK 阻害剤として使用された。ABiC014（D014（細胞細胞細胞特異的ClusterMAP3K8MAP3K8感染細胞患者）感染細胞（無症候性キャリア）非感染細胞感染細胞無症候性キャリアChromatin accessibility (Log2 FC > 0)感染細胞無症候性キャリア感染細胞（ウイルス遺伝子）
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