ytisnetni npCil*AB5ー＋ー＋iFIlfo lEo ll*123ilif evitaeR0NVP-231ilinp f rebmunevit rebmun)dof(serehpsoruenaeR)dof(serehpsoraueeRnevitCDD2.5 2.01.51.00.500NVP-231＋ー＋ーー＋ー＋***2.01.51.00.5NormalNPCNPCNPCの病態におけるCerKの関与 マウス（63日齢）の脳に含まれるC1P量をLC/MS/MSにより測定したところ、NPC1-/-マウスでは野生型マウスに比べてC1P量が増加していた（図5A）。そこで、NPCの病態におけるCerK/C1Pの関与を検証するために、NPC1とCerKを欠損した2重欠損マウス（DKOマウス）を作製した。これらマウス（45日齢）の小脳組織切片における遊離型コレステロールをフィリピンにより染色したところ、NPC1-/-マウスの小脳において遊離型コレステロールの蓄積が観察され、DKOマウスでは遊離型コレステロールの蓄積が減弱している様子図4 疾患特異的iPS細胞を活用した解析A：本実験の培養プロトコールを示す。B、C：健康成人およびNPC患者に由来するiPS細胞から分化誘導したニューロンに100 nM NVP-231を48時間処理した時のフィリピン染色像（B）とフィリピンの平均蛍光強度の比（n=3-4, one-way ANOVA）（C）。D：継代時におけるニューロスフェアの数（n=3 per group, Student’s t-test）。E：2回目の継代時におけるニューロスフェアの数。100 nM NVP-231は1回目の継代時から処理した（n=4-5, Student’s t-test）。mean±SEM。*p<0.05、*** p<0.001。が観察された（図5B）。次に、マウス（45日齢）の小脳プルキンエ細胞を、抗Calbindin抗体を用いた免疫染色により観察したところ、NPC1-/-マウスではプルキンエ細胞の顕著な脱落が観察されたが、DKOマウスでは神経脱落が抑制されていた（図5C）。小脳の各lobeにおけるプルキンエ細胞の数を計測したところ、NPC1-/-マウスのlobeⅡ、Ⅲ、Ⅳ/Vにおいてプルキンエ細胞の顕著な脱落が観察され、DKOマウスでは脱落が抑制されていた（図5D）。NPCの脳においては、グリア細胞が活性化し、神経脱落を促進することが知られている。そこで、マウス（45日齢）の小脳組織切片において、アストロサイト93iPSCSeedingDay0iPSCNormal iPSC-derived neuronsNVP-231Passage 1Passage 210 or 11NeurosphereNPC iPSC-derived neuronsNormal***NPCPassagePassage 3Filipin staining4416Neuron1.5***1.00.5Normal
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